3)开发更高效的基因编辑工具。CRISPR/Cas系统的快速发展显著扩展了基因编辑的应用范围。为了克服植物基因组功能冗余带来的挑战,研究者们开发了Multi−Knock技术。这一技术工具箱能够实现多靶向基因组规模的编辑,支持同时编辑多个基因位点,为复杂性状的多基因改良提供了有效手段
[80]。在提高基因插入效率方面,研究者们利用转座因子(TE)的自然转移能力,通过共表达水稻Pong DNA转座子系统与Cas9/Cas12a,开发出了TATSI系统。这一系统在模式植物拟南芥和农作物大豆中实现了高效靶向整合,显著提升了植物基因组编辑的效率和准确度
[81]。精准定点插入工具PrimeRoot,采用引导编辑工具和位点特异性重组酶系统,能够在植物中实现大片段DNA的高效、精确插入
[82]。此外,研究者创新性地利用AI辅助的大规模蛋白结构预测,建立了全新的基于三级结构的高通量蛋白聚类方法。这一方法成功挖掘了脱氨酶的功能结构,并鉴定出了与已知脱氨工具酶完全不同的全新底盘元件,从而开发出一系列具有自主知识产权的新型碱基编辑工具
[83]。然而,尽管这些技术在理论和实验上取得了显著进展,目前在水稻中的应用仍然有限。特别是Multi−Knock技术、TATSI技术以及基于AI开发的新型碱基编辑工具尚未广泛应用于水稻育种中。此外,PrimeRoot技术采用粒子轰击进行供体传递,导致编辑效率较低。因此,未来的研究需要进一步开发和优化新的基因编辑系统,提高编辑的精确性和效率,特别是在大片段基因插入和替换方面的应用。这些技术的进步,将为水稻育种提供更加多样化和高效的手段。